引物二聚体是指在PCR过程中,由于引物自身互补或引物之间相似序列的存在,导致引物自身形成双链结构的现象。引物二聚体的形成主要是由于引物设计不合理或反应条件控制不当造成的。在PCR过程中,引物需要与模板DNA结合,进行DNA的复制和扩增。
1、出现这种情况的原因如下:根据分析测试百科网资料,最常见的原因是引物二聚体过大,无法很好地被离心或过滤装置所过滤,导致水分子被带出来。如果引物二聚体在配制或储存过程中含有杂质或污染物,这些物质可能会使引物分子结构发生变化,从而导致水分子跑出。
2、就是整个过程某一个东西被污染了。例如管子不干净、水不干净、酶被污染、操作失误等,肯定是哪个环节有毛病。
3、引物二聚体是引物的3端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的,只是或多或少的问题,电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现,只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度,降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。
4、引物二聚体是引物3端不匹配放大形成的。 引物二聚体的出现是必然的,但这或多或少是个问题。电泳时引物二聚体带的缺失并不意味着没有二聚体,而是其含量低,我们肉眼是看不到的。提高PCR的严格程度(包括提高退火温度和降低引物浓度)可以大大降低二聚体的浓度。
5、引物二聚体的形成主要是由于引物设计不合理或反应条件控制不当造成的。在PCR过程中,引物需要与模板DNA结合,进行DNA的复制和扩增。但如果引物自身存在互补序列,这些互补序列就会在PCR过程中相互结合形成双链结构,导致出现引物二聚体。
6、根本原因应该是RNA纯度不够,导致反转录的cDNA浓度低。稀释之后DNA与引物结合的机会少了,引物自己结合成二聚体.多种原因要逐一排除:先用内参基因检测一下如 β-actin,GAPDH,18s-rRNA这类基因是生物体或者细胞中稳定表达的基因,表达量几乎不变,如果有条带证明反转录没问题。
1、长度:引物二聚体的长度是两条引物结合形成的双链,短,不会与目的条带混在一起,而目的条带的长度取决于目的基因的长度。Tm值:引物二聚体和目的基因都存在,可以通过熔解曲线的波峰所对应的Tm值判断。Tm值和目标基因的Tm值一样,则是目标基因,和引物二聚体的Tm值一样,是引物二聚体。
2、引物二聚体在溴芬蓝前面,通常条带较宽,不干脆,有拖尾。而PCR产物条带清晰干脆。据此即可判定是否为目的条带。
3、这个不好说:一般引物二聚体小于150BP.条带模糊、条带宽、跑的比较快在溴酚蓝前面.你可以跑胶过程总观察一下。如果不是可能为非特异性扩增。
4、主要需要优化引物设计,使用专业设计软件检查,避免引起二聚体的序列。适当延长引物,可提高引物与模板的结合效率,提高特异性。2)优化反应体系:适当提高退火温度可以有效提高特异性。
5、如果没有的话建议做两个对照试验:一是PCR体系里加模板和酶,不加引物;二是PCR体系里加引物和酶,不加模板。这两个和正常实验组一起P一起跑胶,然后对照着看一下,到底是哪个组分的问题。
6、怎么鉴别引物二聚体和产物 这个不好说:一般引物二聚体小于150BP.条带模糊、条带宽、跑的比较快在溴酚蓝前面.你可以跑胶过程总观察一下。如果不是可能为非特异性扩增。
引物二聚体的产生原因是引物的3端间相互错配扩增形成,只有引物二聚体没有目的扩增产物原因有以下几点:1)主要需要优化引物设计,使用专业设计软件检查,避免引起二聚体的序列。适当延长引物,可提高引物与模板的结合效率,提高特异性。2)优化反应体系:适当提高退火温度可以有效提高特异性。
其实,如果序列没有什么特别的,只有引物二聚体的话,通常要么是模板,要么是引物设计出问题了。因为体系中没有匹配的序列供引物去识别和结合,只能形成二聚体了。
那可能你的条件不是很适合,所以没有P出来,你可以改变模板的浓度,还可以改变退火温度,还可以加入Mg ,DMSO等。
引物二聚体是指在PCR过程中,由于引物自身互补或引物之间相似序列的存在,导致引物自身形成双链结构的现象。引物二聚体的形成主要是由于引物设计不合理或反应条件控制不当造成的。在PCR过程中,引物需要与模板DNA结合,进行DNA的复制和扩增。
是在pcr反应中,两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体,这种聚合体出现了,就相当于原本可以扩增的原料链减少了,即会导致扩增的效率降低,所以最好能避免这种物质的出现.。
引物二聚体是引物的3端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的,只是或多或少的问题,电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现,只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度,降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。
引物二聚体是引物3端不匹配放大形成的。 引物二聚体的出现是必然的,但这或多或少是个问题。电泳时引物二聚体带的缺失并不意味着没有二聚体,而是其含量低,我们肉眼是看不到的。提高PCR的严格程度(包括提高退火温度和降低引物浓度)可以大大降低二聚体的浓度。
引物二聚体是PCR扩增时,正反向引物结合。
长度:引物二聚体的长度是两条引物结合形成的双链,短,不会与目的条带混在一起,而目的条带的长度取决于目的基因的长度。Tm值:引物二聚体和目的基因都存在,可以通过熔解曲线的波峰所对应的Tm值判断。Tm值和目标基因的Tm值一样,则是目标基因,和引物二聚体的Tm值一样,是引物二聚体。